如何檢測大腸桿菌?

1、大腸桿菌

大腸埃希氏菌(Escherichia coli, E. coli),通常稱為大腸桿菌,是人和很多動物腸道中的一種兼性厭氧菌。

(1)抗原結構

大腸桿菌的抗原成分複雜,可分為菌體O抗原、表面K抗原、鞭毛H抗原和菌毛F抗原四種。血清學分型常涉及到O抗原及H抗原。O抗原為為細胞壁脂多糖最外層的特異性多糖;H抗原位於鞭毛上,為鞭毛蛋白抗原。

根據抗原結構不同,已知大腸桿菌有菌體O抗原170種,鞭毛H抗原60種,因而構成了許多血清型。

(2)致病性

在腸道內正常棲居條件下的大腸桿菌,是不致病的。當機體免疫力低下,或當侵入腸道以外部位時,可引起腸道內或腸道外疾病,因此大腸桿菌為條件致病菌。

在腸道內,某些血清型的大腸桿菌可引起急性腹瀉。這些能夠引起腸道內急性腹瀉的大腸桿菌統稱為致瀉性大腸桿菌(Diarrheagenic Escherichia coli,DEC)。

2、致瀉性大腸桿菌檢測方法

(1)生化鑑定

生化鑑定常用三糖鐵瓊脂(TSIA)和KIA/MIU(AA+-/++-)和IMVC(++--)來初步鑑定。最後鑑定依據全面生化反應,典型的大腸埃希菌的基本生化反應特徵:TSIA(雙糖鐵)產酸/產氣,產氣、CIT(枸櫞酸鹽)陰性、URE(脲酶)陰性、IDN(吲哚)陽性、MOT(動力)+/-、ORN(鳥氨酸)+/-。

(2)血清學鑑定

血清學鑑定在大腸桿菌的檢測技術發展史上佔有核心地位。在毒力因子檢測技術出現之前,血清學分析是致瀉性大腸桿菌菌株分類的主要根據。1944年,Kauffman提出一種血清學分類的標準,該標準經過不斷修改一直沿用至今。天津生物晶片公司擁有5種致瀉性大腸桿菌的O抗原診斷血清系列產品。

(3)分子生物學檢測

致瀉性大腸桿菌是最早應用分子診斷法的一類致病菌。事實上,分子生物學方法是糞便菌群中致瀉性大腸桿菌不同型別間相互間區分以及它們與非致病性大腸桿菌之間相區分的最普遍、可靠的技術。目前對致瀉性大腸桿菌的分子生物學檢測研究,在核酸探針技術和PCR法兩個方面已經獲得了重大進展。

① PCR試驗:PCR是檢測致瀉大腸埃希菌及其毒力島的一種重要的分子生物學診斷方法。PCR引物設計,成功地用於檢測ETEC (elt、estA、estB)、EPEC (eae、bfp)、EHEC(eae、SLTI、 SLTII)、EIEC(ial、ipaH)、EAEC(aaf-II)、DAEC(daaE)等各種毒力因子和毒力島。

② 核酸探針雜交:Moseley等首先應用DNA探針雜交代替複雜而昂貴的動物試驗,檢測ETEC LT和ST腸毒素。隨後DNA探針技術廣泛用於各類致瀉性大腸桿菌的鑑定。

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