高二生物選修三基因工程知識點

　　基因工程是指按照人們的願望，進行嚴格的設計，通過體外DNA重組和轉基因技術，賦予生物以新的遺傳特性，創造出更符合人們需要的新的生物型別和生物產品。接下來小編為你整理，一起看看吧!

　　【一】

　　基因工程的基本操作程式

　　1.目的基因是指： 編碼蛋白質的結構基因 。

　　***1***獲取方法：從基因文庫中獲取目的基因

　　***2***人工合成法：化學方法合成DNA片段***反轉錄法、直接合成法***

　　***3***PCR反應擴增DNA

　　2.PCR技術擴增目的基因

　　***1***PCR的含義：聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外複製特定DNA片段的核酸合成技術。

　　***2***目的：獲取大量的目的基因

　　***3***原理：DNA雙鏈複製

　　***4***過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈為單鏈;

　　第二步：冷卻到55～60℃，引物與兩條單鏈DNA結合;

　　第三步：加熱至70～75℃，熱穩定DNA聚合酶從引物起始進行互補鏈的合成。

　　【二】

　　基因表達載體的構建***核心***

　　1.目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在，並且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用。

　　2.組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因

　　***1***啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位於基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質。

　　***2***終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段 ，位於基因的尾端。

　　***3***標記基因的作用：是為了鑑定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。常用的標記基因是抗生素基因。

　　3.重組質粒形成過程:

　　***1***用一定的限制酶切割質粒，使其出現一個切口，露出黏性末端。

　　***2***用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端。

　　***3***將切下的目的基因片段插入質粒的切口處，再加入適量DNA連線酶，形成了一個重組DNA分子***重組質粒***

　　【三】

　　將目的基因匯入受體細胞—轉化

　　1.轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，並且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。 2.常用的轉化方法：

　　將目的基因匯入植物細胞：採用最多的方法是 農桿菌轉化法，其次還有 基因槍法和 花粉 管通道法等。

　　將目的基因匯入動物細胞：最常用的方法是 顯微注射技術。方法的受體細胞多是 受精卵。

　　將目的基因匯入微生物細胞：原核生物作為受體細胞的原因是 繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉化方法是：先用 Ca2+ 處理細胞，使其成為感受態細胞 ，再將重組表達載體DNA分子 溶於緩衝液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。

　　3.重組細胞匯入受體細胞後，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達。

　　【四】

　　目的基因的檢測和表達

　　1.首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是採用DNA分子雜交***DNA-DNA***技術。

　　2.其次還要檢測目的基因是否轉錄出mRNA，方法是採用分子雜交***DNA-RNA***技術。

　　3.最後檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是採用抗原—抗體雜交技術。

　　4.有時還需進行個體生物學水平的鑑定。如生物抗蟲或抗病的鑑定等。