做分子生物學試驗，往往是離不開引物設計的，但是當我們用引物設計軟件設計出引物的時候，引物的特異性決定了PCR的產物是否有雜帶而影響下游試驗，在此簡要介紹如何使用NCBI裡面的primer-BLAST進行引物特異性的驗證
工具/原料
NCBI官方網站
方法/步驟
打開瀏覽器，輸入進入NCBI網站
在此網頁下方處找到Primer-BLAST，點擊進入
點擊進入以下界面，在Primer Parameters裡面輸入自己已經設計好的引物序列，在此以病毒DNA序列為例子進行闡述，該引物為擴增EB病毒（人類皰疹病毒4型）DNA一段序列的引物。
隨後，在Primer Pair Specificity Checking Parameters裡面的Databse中選擇選項“Genome（chromosomes from all organisms）”，由於舉的例子是擴增病毒DNA的引物，用於擴增患者是否攜帶該病毒，所以要避免該引物擴增出人體DNA中的片段，從而在下面“Organism”裡面選擇“Homo sapiens”
之後直接點擊頁眉左下角的“Get Primers”按鈕進行引物特異性的驗證，點擊後的頁面如圖所示。
大概稍等一會兒，就會得到結果，結果頁面如下圖。本條引物在擴增時可能會出現兩天雜帶，但是該段引物序列與人基因組序列還是存在鹼基的不一致，所以也可能擴增不出來，另外產物的片段大小與目的片段大小差異較大，故本對引物的特異性很好!
注意事項
輸入自己設計好的引物時，注意引物的順序是不是5'端至3‘端