先來了解一下尼康落射熒光顯微鏡Optiphot-2 結構圖片：
步驟一：熒光觀察及開機
開啟熒光電源，此時綠燈會亮起，一定要持續壓著激發鈕約5 - 10秒待橘燈亮起後或是閃爍後橘燈熄，才可放手。若是燈無法亮起，請關電源重新開啟綠燈，一定要持續壓著激發鈕約5 秒以上待橘燈亮起後，才可放手。等待約10秒橘燈再亮起，燈源才會穩定，但此時熒光汞燈尚未完全氣化, 要等待約10分鐘後可開始使用。
將明視野鹵素燈源關到最小，依據所使用之熒光染劑將相符之熒光濾片轉至定位，確定shutter切到O之位置即可觀察。
熒光燈源開機後至少使用30分鐘，關機後距離下次開機時間最少須間隔30分鐘。
使用熒光UV 濾片要注意亮度,若示燈源太強,請使用ND 濾片
步驟二：顯微鏡主機操作
開啟燈源，置上標本，調整亮度。
先以4X觀察（此時聚光鏡要旋出），轉粗調對焦，10X以上之物鏡不可將聚光鏡旋出。
調整瞳孔距離。
視差調整：閉左眼調右邊，閉右眼調左邊。
聚光鏡光圈切至物鏡NA值70﹪~80﹪位置。
聚光鏡調整至最高位置。
光軸校正之步驟：（搬動顯微鏡才需做）：
1.先以10倍對焦標本。
2.將視野光圈關至最小。
3.升降聚光鏡至八角形最清楚。
4.視野光圈放大至接近視野。
5.若八角形不在中心，則旋轉聚光鏡位置調鈕至最中心。
6.再將光圈稍放大比視野大即可。
物鏡切換由低倍漸至高倍，4x、10x可以用粗調節輪調整，40x、100x只能以細調節輪做微調調整，如此才能避免物鏡與玻片磨損造成刮傷。
40x 物鏡上有一圈校正環，可旋轉，調整影像清晰度。
100倍物鏡為油鏡，使用時需滴鏡油，用完後須以拭鏡紙沾95﹪以上酒精多次擦拭才能乾淨。
若玻片有滴油，請勿以40倍物鏡觀察，以免鏡油沾到影響觀察；若沾到油，則以拭鏡紙沾95﹪以上酒精多次擦拭乾淨即可。
步驟三：影象提取
將需提取的影象置於視野正中央，將目鏡筒以順時針方向轉90度，將影像切換至相機。
在電腦開啟ACT-1軟體，提取影象。
此外可以參閱ACT-1 軟體使用手冊。